生物实验室感染事件无论是过去还是现在都有 发生，近代在国内外先后发生过实验室感染肺炭疽、 布氏菌、 SARS 事件，并出现死亡病例。为加强实验 室生物安全管理，我国于 2004 年颁布《实验室生物 安全通用要求》 GB19489 －2004，对生物实验室二级 及其以上级别生物安全柜在现场安装、移动、检修后 等情况下规定了多项必测项目，而对微生物污染模 拟试验未作要求，相关的报道也不多。2005 年国家 食品药品监督管理局颁布了《生物安全柜行业标 准》 YY0569 － 2005，参考了美国标准 NSF49 － 2002 和欧洲标准 EN12469 － 2000 的部分要求。为进一 步评估生物实验室内二级生物安全柜的安全性能， 我们专门对交叉污染、产品保护和人员保护性能进 行了微生物污染模拟现场试验。现将结果报告如 下。

1 材料和方法

1. 1 试验材料 试验选择苏州市疾病预防控制中心生物实验室 使用中的生物安全柜;该安全柜为BHC － ⅡB2 型生 物安全柜，为国内某空气技术有限公司产品。 模拟试验菌株为枯草杆菌黑色变种( ATCC 9372) 芽孢，购自中国菌种保藏中心。按 2002 年版 《消毒技术规范》规定的细菌芽孢制备方法，培养制 备出芽孢悬液，试验时配制成不同含菌量的试验芽 孢悬液。 1. 2 测试方法 1. 2. 1 交叉污染保护测试 目的是确定安全柜在 防止产品在同一工作室内互相细菌传播污染的保护 功效。试验装置和布样详见图1。①试验用圆筒及 其设置:在安全柜操作台面中央放置一直径100 mm 的不锈钢圆筒，模拟实验时操作人员的手臂，一端紧 靠安全柜的后壁，一端伸出安全柜工作窗150 mm。②喷雾器的设置: 将装有 55 ml 含菌量为 5 × 104 cfu/ml的枯草杆菌黑色变种芽孢菌混悬液的喷雾器 置于安全柜左侧面中央离操作台面向上 100 mm 处，喷雾器背面紧靠内壁。③培养基平板的设置:将 事先制备的直径90 mm 普通营养琼脂平板( 以下试 验相同) ，布放到各采样点自然沉降法采样; 在喷雾 器喷嘴的下方台面往右侧方向排列两个对照平板， 紧靠对照平板右侧排三列平板，每列 5 个。④采样 和培养程序: 安全柜运行 30 min 后，打开各采样点 平板盖，启动喷雾器喷菌5 min，喷雾器停止 5 min 后，将采样平板盖上，置于37℃条件下培养48 h，计 算菌落数。在安全柜操作台两侧各作重复测试。

1. 2. 2 产品污染保护测试 目的是测定工作室外 微生物是否会致安全柜内部受到污染。试验装置和 布样详见图2。① 试验用圆筒及其设置: 同上。② 喷雾器的设置: 将装有 55 ml 枯草杆菌黑色变种芽 孢菌混悬液( 5 ×106cfu/ml) 的喷雾器置于安全柜操 作窗外侧的水平中心，水平喷射轴在工作台面向上 350 mm 处，平行于工作面，喷嘴距工作窗外侧100 mm，并朝向工作窗。③ 平板设置: 将 40 个培养基 平板布放在安全柜台面实验用圆筒中轴线两侧( 每 侧4 列共20 个) ，另将 1 个对照平板放置于工作区 前回风凹槽的上方。④ 采样和培养程序: 安全柜运 行30 min 后开始试验，打开平板盖，喷菌 5 min，喷 雾器停止5 min 后，将采样平板盖上，置于37℃条件 下培养48 h，计算菌落数

1. 2. 3 人员保护测试 测试工作人员在工作室内 是否会受到柜内微生物感染，确定生物安全柜密封 保护性。试验装置和布样详见图3。① 试验用圆筒 及其设置同上。在圆筒中心轴下方、位于前窗操作 口进分隔删的上方放置一个阳性对照平板。② 喷 雾器的设置:将装有 55 ml 枯草杆菌芽孢菌混悬液 ( 5 ×108cfu/ml) 的喷雾器置于操作柜内左右内壁的 中央，水平喷射轴在工作台面上方 35 mm 处，平行 于工作面。喷雾器的喷嘴距工作窗内侧100 mm 处 朝向工作台，喷菌量≥1 ml/min。③ 撞击采样器的 设置:操作窗外测人员所在区域设6 个撞击式采样 器，空气采样量为 12. 5 L/min。采样口设置在安全 柜工作窗外侧63 mm 处，其中两个采样口的轴心线 相隔150 mm，分别位于试验圆筒的两侧并于试验圆 筒等高;两个采样器的轴心线相隔50 mm，分列试验 圆筒的两侧于圆筒下沿30 mm 的水平面上; 另两个 采样器轴心线相距300 mm，水平面位于工作台面向 上360 mm。④ 两个狭缝采样器的设置: 采样口与 安全柜工作台面齐平，垂直轴线距安全柜操作窗向 外150 mm，分别距左右两侧的内壁200 mm，以空气 采样量为 28. 33 L/min 进行采样。⑤ 采样和培养 程序:生物安全柜运行30 min 后开始试验。首先启 动狭缝采样器，采样 5 min 后，启动染菌喷雾器，喷 雾染菌1 min 后启动撞击采样器，采样 5 min; 停止 染菌喷雾器，至30 min 后停止狭缝采样器。采样后 所有撞击采样器的采样液在无菌条件下用孔径 0. 22 μm 的滤膜过滤后，取出滤膜置于营养琼脂培 养基平板上，连同两个狭缝采样器内的采样平板，均 置于37℃条件下培养48 h，记录平板上菌落数。试 验均重复3 次。

2 结果 检测结果表明，交叉污染测试细菌总数分别为 ≤1 cfu/次;产品保护测试细菌总数≤1 cfu/次;人员

保护测试结果，撞击式采样器采集到细菌总数为2 cfu/次，狭缝式采样器采集到细菌总数均为≤1 cfu/次( 表1) 。

3 讨论 虽然生物安全柜的安全性可以通过常量气流和 过滤测试来获取相关数据，但由于相关生产企业试 验条件的局限，极少进行微生物试验的评价，在实际 使用中的安全性应当给予关注。因此，本试验 3 项 微生物测试评估结果对于应用实际具有重要意义。 本试验通过对安全柜进行模拟喷菌试验，获取了相 关信息，按欧盟标准〔1〕和美洲标准〔2〕，在人员防护

试验中，撞击式采样器的菌落总数允许≤10 cfu/次， 狭缝式采样器菌落总允许≤5 cfu/次;产品防护试验 和交叉污染测试指标，标准菌落总数允许值分别为 ≤5 cfu/次和≤2 cfu/次。本次试验的结果表明该生 物安全柜在安全性方面已达到了国际通用要求。有 学者在抽测3 台生物安全柜的试验中发现，除了交 叉测试能达到要求外，其余两个指标都未能达标，显 示生物安全柜大多有细菌逸散的问题存在。 随着生物安全柜的应用越来普及，应当重视其 实际使用中安全性能的维护和保持，因为生物安全 柜在制造、现场安装、使用等各个环节有很多因素影 响其安全性，有必要常规进行其安全性能测试和评 价。