生物安全柜是保证实验室生物安全的重要防护设施，可以提供对人员、产品、环境的保护。省疾病预防控制中心生物实验室担负着项目繁多、种类复杂的检品，检验人员的防护措施主要靠生物安全柜。为了解生物安全柜的防护性能，我们以本中心实验室引进的美国 LABCONCO 型Ⅱ级 B1 型生物安柜为代表，对其生物因子防护性能进行了检测和评价。现将检测结果报告如下。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

实验设备为 LABCONCO 型Ⅱ级 B1 型生物安柜，为美国进口产品，位于本中心微生物实验室。主要试验仪器有 TK － 2 气溶胶发生器、安德森二级采样器、AGI 液体撞击式采样器、热球式风速仪、声级计、照度计和气流检查器等。试验指标菌为枯草杆菌黑色变种( ATCC 9372)芽孢，由军事医学科学院消毒检测中心提供; 采用胰酶大豆琼脂培养基和胰酶大豆液体培养基，均为国内市售产品。

模拟手臂所用的不锈钢圆筒是按照标准规定的试验方法自行设计制作。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 气溶胶发生液的制备 将枯草杆菌黑色变种菌种接种于胰酶大豆琼脂培养基平板划线分离培养后，挑取典型菌落接种于胰酶大豆营养肉汤培养基中，于 37℃ 培养 24 h。取培养物均匀涂布于罗氏瓶中营养琼脂培养基表面，置 37℃ 培养 7 d ，经细菌芽孢染色镜检，确认芽孢形成率 ＞ 95% 时，收取芽孢。将新收取芽孢悬液用双层脱脂纱布过滤，3 000 r/min 离心 10 min，PBS 缓冲液反复清洗 3次; 灭活繁殖体，梯度稀释，活菌计数即成芽孢悬液，4℃保存备用。

1. 2. 2 环境本底采样 在对安全柜作测试前，先对实验室环境和安全柜进行清洁消毒，再用安德森二级采样器对生物安全柜所在实验室环境本底进行采样，以确定测试环境中是否含有与试验菌相同的细菌。采样流量 28． 3 L / min，采样 15 min，对采样平板进行培养，观察和鉴定。

1. 2. 3 人员保护测试 ① 调整好安全柜内气流:将安全柜内气流速度设置为规定的标准值，让安全柜处于工作状态。② 发生气溶胶: 在 TK － 2 气溶胶发生器装入含菌量为 6. 5 × 108 /ml 的芽孢悬液 20ml，置于安全柜内两侧壁之间，发生器喷嘴前端在前窗操作口内 10 cm，其轴线在工作台面上方 36 cm处，以流量为 7. 5 L /min，喷射方向平行于工作台面且正对前窗操作口进行喷雾染菌。③ 采样: 将外径为 6. 3 cm 的不锈钢圆筒固定在安全柜工作台面上中心位置，一端贴于安全柜的后壁，另一端从安全柜的前窗操作口伸出安全柜至少 15 cm，圆筒轴线距工作台面 7 cm; 将 6 个 AGI 液体撞击式采样器呈左右对称放置在安全柜前，采样口正对安全柜; 其中 2个采样器的采样口轴线相距 15 cm、与圆筒上沿平齐，另 2 个采样器采样口轴线相距 5 cm、位于圆筒下沿 3 cm 的水平面上，采样口前端距安全柜均为6. 3 cm; 最后 2 个采样器的采样口水平面在工作台面上方36 cm 处，采样口前端距安全柜 5 cm，采样口轴线距安全柜中线 15 cm; 所有采样器的流量均以12. 0 L /min 进行采样。将阳性对照琼脂培养基平板布放在圆筒下，位于前窗进气格栅上方 1 cm，作沉降采样。④ 安德森采样器采样: 将 2 个安德森二级采样器的采样口平面与安全柜工作台面平齐，采样口的垂直轴线在安全柜前方 15 cm 处，各距侧壁20 cm; 以采样器流量为 28. 3 L /min 进行采样。⑤测试顺序: 首先启动安德森二级采样器采样，5 min后，再启动 TK － 2 气溶胶发生器，共喷雾染菌 6． 5min; 第 6 min 启动 AGI 液体撞击采样器，采样 5min; 30 min 后停止安德森二级采样器采样。⑥ 培养: 对 AGI 液体撞击采样器的采样液用一直径为4. 7 mm、孔径 0. 22 μm 滤膜进行过滤，取出滤膜置于合适的培养基平板上; 将贴有撞击采样器采样液滤膜的平板、安德森采样器采样的平板以及各种对照平板，均置于 37℃培养 24 ～ 28 h 观察结果，进行细菌查计数; 试验重复 3 次。⑦结果判定: 平板上枯草杆菌黑色变种芽孢生长数限制值符合以下条件判定为合格: 所有撞击采样器采样液滤膜平板上菌数应≤10 cfu，安德森采样器采样平板上菌数应≤5cfu，阳性对照平板上菌数应 ＞ 300 cfu。试验重复 3次，均符合要求。

1. 2. 4 产品保护测试 ①调整好安全柜内气流:将安全柜内气流速度设置为规定的标准值，让安全柜处理工作状态。②采样准备: 在安全柜的工作台面上排满敞开的营养琼脂培养基平板 50 个。将外径为 6. 3 cm 圆筒固定在安全柜工作台面上的中心区，一端贴住工作区的后壁，另一端从前窗操作口伸出安全柜至少 15 cm，圆筒的轴线高于工作台面 7cm; 将 1 个阳性对照培养基平板放在圆筒下，位于前窗进气格栅上方 1 cm。③ 发生气溶胶: 在 TK － 2气溶胶发生器装入含菌量为 6. 5 × 106 /ml 的芽孢悬液 20 ml，安放在安全柜外，喷射轴在安全柜中心并与前窗操作口上沿平齐，喷嘴前端位于前窗操作口外 10 cm，喷雾方向平行于工作台面，正对前窗操作口; 启动 TK － 2 气溶胶发生器，流量为 7. 5 L /min，喷雾 5 min 后关闭。④ 采样: 让所有打开的培养基平板自然沉降 10min，立即盖上平板盖，置于 37℃ 培养 24 ～ 48 h 观察结果，进行菌落计数。试验重复 3次。⑤ 结果判定: 所有柜内实验组采样平板上的枯草杆菌黑色变种芽孢菌数之和应≤5 cfu，阳性对照采样平板上菌数应 ＞ 300 cfu，即可判定为合格。试验重复 3 次，均符合要求。

1． 2． 5 交叉污染保护测试 ① 调整好安全柜内气流: 将安全柜内气流速度设置为规定的标准值，让安全柜处于工作状态。② 气溶胶染菌准备: 在 TK － 2气溶胶发生器装入含菌量为 6． 5 × 104 /ml 的芽孢悬液 20 ml，置于安全柜内，紧靠左侧内壁的中心，喷射轴线在工作台面上 12 cm 处，喷射方向平行于工作台面正对面的侧壁。③ 布放采样平板: 将敞开的琼脂培养皿从前至后排列在工作台面上: 2 排对照培养皿位于 TK － 2 气溶胶发生器喷嘴下方; 距喷雾器所在侧壁 36 cm 处放 1 排培养皿; 距喷雾器所在侧壁36cm 外放2 排培养皿。④ 开启 TK － 2 气溶胶发生器，以流量 7． 5 L /min，喷雾 5 min 后关闭; 自然沉降 20 min 采样，盖上平板盖。将所有采样平板置于 37℃培养 24 ～ 28 h 观察结果，进行菌落计数。⑤另一侧重复: 将喷雾器放于靠右侧内壁中央执行上述步骤。⑥ 结果判定: 距被检测侧壁 36 cm 外的采样平板上枯草杆菌黑色变种芽孢菌数之和应≤2cfu; 距被检测侧壁 36 cm 内的采样平板( 阳性对照)的枯草杆菌黑色变种芽孢菌数之和 ＞ 300 cfu，即可判定合格。安全柜的左右侧均各重复试验 3 次，每次试验结果均符合要求。

1. 2. 6 下降气流流速测试 在工作区上方高于前窗操作口上沿 10 cm 的水平面上方呈等距离安排测量点，形成 15cm × 15cm 的正方形栅格，测试点最少应有 3 排，每排 7 个测量点。测试区域边界与安全柜的内壁及前窗操作口的距离应为 15 cm。用风速计探针准确定位在各测量点进行测量，记录各测量值并计算平均值。结果判定: 下降气流流速在 0. 25～ 0. 5 m /s 之间为合格。

1. 2. 7 流入气流流速测试 用风速计在前窗操作口平面测量两排各点的气流流速，第一排在前窗操作口上沿下 1 /4 开口高度位置; 第二排在前窗操作口上沿下约 3 /4 开口高度位置; 测量点间隔 10 cm，距前窗操作口的侧边不少于 10 cm，计算各测量值的平均值。结果判定: Ⅱ级 B1 型安全柜流入气流平均流速应≥0. 5 m /s。

1. 2. 8 气流烟雾模式测试 ①下降气流测试: 烟雾沿着工作表面的中心线，在前窗操作口顶端以上10 cm 的高度，从安全柜的一端到另一端。②观察窗气流测试: 烟在观察屏后 2. 5 cm、前窗操作口顶端以上 15 cm 高度从安全柜的一端到另一端; ③前窗操作口边缘气流测试: 烟在安全柜外大约 3. 8 cm处沿着整个前窗操作口的周界经过，特别应注意角落和垂直边缘。④滑动窗密闭性测试: 烟在滑动窗内从距安全柜侧壁 5 cm 处沿工作区上沿经过。⑤结果判定: A． 下降气流和观察窗气流: 工作区内的气流应向下，不产生旋涡和向上气流且无死点，气流不从安全柜中逸出。B． 前窗操作口边缘气流气流:应不从安全柜中溢出。C． 滑动窗密闭性: 前窗操作口整个周边气流应向内，无向外逸出的气流。前窗操作口流入气流应不进入工作区。

1. 2. 9 噪声测试 ①打开安全柜的风机和照明灯，在安全柜前壁中心水平向外 30 cm、工作台面上方38 cm 处测量噪声。②关闭安全柜的风机和照明灯，在相同位置测量背景噪声; ③当背景噪声大于57 dB( A) 时，实测值按规定进行修正。④结果判定: ≤67 dB( A) 。

1. 2. 10 照度测试 在工作台面上，沿工作台面两内侧壁中心连线布点，测量点之间距离不超过 30cm，与侧壁最小距离为 15 cm; 关掉安全柜的灯，从一侧起依次在测量点进行背景照度测量。打开灯、启动风机，从一侧起依次测量台面照度。结果判定:平均照度≥650 lx，最低照度≥430 lx。