3.6 人员、产品与交叉污染保护

3.6.1 人员保护

人员保护有 2 种检测方法 ：微生物法和碘化钾法。微生物法需制备枯草芽孢、杆菌芽孢，测试后要经过细菌培养，操作复杂，用时较长，不便于外出开展检测。碘化钾法是定义在 EN12469 上的，测试方法与微生物法相同，用碘化钾代替了细菌，可当场验证安全柜污染控制性能，操作性强，用时较短。

（1）微生物法。将盛有 5×108/mL~8×108/mL 的芽孢悬浮液的喷雾器放在安全柜内，喷雾器喷嘴的轴线在工作台面上方 360mm 处，喷嘴前端位于前窗操作口内 100mm处，喷雾方向平行于台面且正对操作口 ；喷雾器的圆筒固定在台面上的中心，一端贴住工作区的后壁，另一端从操作口伸出安全柜至少 150mm，圆筒的轴线高于台面 70mm ；6 个撞击采样器呈左右对称放置在柜前，6 个采样口正对安全柜 ；1 个阳性对照琼脂培养皿放在圆筒下 ；2 个狭缝采样器的采样口平面与台面平行，采样口的垂直轴线在安全柜前方 150mm 处，各距内侧壁 200mm ；启动喷雾器，运行5min。测试持续 30min。在无菌的条件下，用滤膜滤取所有撞击采样器的采样液体，将滤膜置于培养基上 ；有滤膜的培养基、对照培养皿和狭缝采样器的培养皿在 37.0℃培养。培养到 24~28h 时检查计数，如果呈阴性，继续培养至总培养时间达 44~48h 时检查计数。

Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢杆菌芽孢进行实验，从全部撞击采样器收集的芽孢菌菌落数应不超过 10CFU/ 次，狭缝采样器的培养皿收集的芽孢菌菌落数应不超过 5CFU/ 次，对照皿应阳性（>300CFU）。

（2）碘化钾法。将气雾发生器放置在安全柜的工作台面上，使气雾发生器圆盘的中心位于仪器模拟臂的中心上，圆盘的边缘到安全柜平面开口的距离是 100mm，圆盘与安全柜开口上边缘平行。气雾发生器产生雾状的 KI 微小液滴，安全柜外模拟臂上的 4 个空气采样器采集从安全柜内逃逸出的 KI 微粒。采样结束后，取出采样器内的过滤薄膜，将薄膜放到 PdCl2 溶液中显色，计数薄膜上灰棕色的小圆点。

Ⅱ级生物安全柜用碘化钾法测试，保护因子应不小于1×105，即每个薄膜上灰棕色的小圆点数都应 <62 个。重复试验 5 次，每次均应符合要求。

3.6.2 产品保护

在安全柜的工作台面上排满敞开的琼脂培养皿 ；圆筒固定在台面上的中心区，一端贴住工作区的后壁，另一端从前窗操作口伸出安全柜至少 150mm，圆筒的轴线高于台面 70mm ；盛 有 5×106/mL~8×106/mL 的 芽 孢 悬 浮 液 的 喷雾器放在柜外，喷雾器喷射轴在安全柜中心并与操作口上沿平齐，喷雾器的喷嘴前端位于操作口外 100m，喷雾方向平行于台面，正对操作口 ；一个阳性对照琼脂培养皿放在圆筒下 ；启动喷雾器，运行 5min。喷雾器关闭 5min 后盖上琼脂培养皿的盖子 ；将培养皿在 37.0℃培养。培养到24~28h 时检查计数，如果呈阴性，继续培养至总培养时间达 44~48h 时检查计数。

Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢杆菌芽孢进行试验，菌落数应不超过 5CFU/ 次，对照皿应阳性。

3.6.3 交叉污染保护

将盛有 5×104/mL~8×104/mL 的芽孢悬浮液的喷雾器置于安全柜内，紧靠左侧内壁的中心，喷雾器喷射轴线在工作台面上 76~30mm 处，喷射方向平行于台面，正对对面的侧壁 ；两排对照培养皿位于喷嘴下方，距喷雾器所在侧

壁 360mm 处放一排培养皿， 距喷雾器所在侧壁 360mm 外放一排培养皿 ；启动喷雾器，运行 5min。15min 后盖上培养皿，37.0℃培养。将喷雾器放于靠右侧内壁中央重复测量。培养基培养到 24~28h 时检查计数，如果呈阴性，继续培养至总培养时间达 44~48h 时检查计数。

Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢、杆菌芽孢进行实验，菌落数应不超过 2CFU/ 次。

3.7 下降气流流速

Ⅱ级安全柜下降气流流速应在 0.25~0.5m/s。 下 降气流流速应在标称值 ±0.015m/s。均匀下降气流的安全柜，各测量点实测值与平均流速相差均应不超过 ±20％或 ±0.08m/s。非均匀下降气流的安全柜各区域实测的下降气流流速应在其区域下降气流标称值 ±0.015m/s，各测量点实测值与其区域平均流速相差均应不超过 ±20% 或±0.08m/s。

（1）均匀下降气流的安全柜。在工作区上方高于前窗操作口上沿 100mm 的水平面上，用风速仪多点测量穿过该平面的下降气流流速。测量区域边界与安全柜的内壁及前窗操作口的距离为 150mm ；测量点最少应有 3 排，每排最少应有 7 个测量点，测量点等距分布，形成的正方形栅格不大于 150mm×150mm。

（2）非均匀下降气流的安全柜。在工作区上方高于前窗操作口上沿 100mm 的水平面上，用风速仪多点（测量点间距不大于 100mm）测量穿过该平面各区域的下降气流流速。

3.8 流入气流流速

用密封条带将风量计的风罩密封在安全柜的前窗操作口中心，罩两边留的开口区域也要密封 ；运行安全柜，读取 5 次风量计读数，计算流入气流的平均流量。流入气流的平均流量除以前窗操作口面积，得到流入气流的平均流速。

3.9 气流模式

（1）下降气流测试。烟雾沿工作台面的中心线，在前窗操作口顶端以上 100mm 的高度从安全柜的一端到另一端，观察烟雾流动。Ⅱ级安全柜工作区内的气流应向下，应不产生漩涡和向上气流且无死点 ；气流应不从柜中逸出。

（2）观察窗气流测试。烟在观察屏后 25mm，在前窗操作口顶端以上 150mm 高度从安全柜的一端到另一端，观察烟雾流动。气流应不从柜中逸出。

（3）前窗操作口边缘气流测试。烟在安全柜外大约38mm 处沿着整个前窗操作口的周边经过，观察烟雾流动。Ⅰ级和Ⅱ级安全柜前窗操作口整个周边气流应向内，无向外逸出的气流 ；Ⅱ级安全柜的前窗操作口流入气流不进入工作区。

（4）滑动窗密闭性测试。烟在滑动窗内从距安全柜侧壁和工作区顶部 50mm 经过，观察烟雾流动。气流应不从柜中逸出。

3.10 集液槽泄漏

用至少 4L 水充满集液槽，保持 1h。1h 后应无渗漏。

3.11 稳定性

采用静力加载测试安全柜结构的稳定性，包括柜体抗翻倒，柜体抗变形，柜体抗向前倾倒和工作台面抗变形。

3.12 温升

安全柜照明灯和风机持续运行 4h 后，测量安全柜前窗操作口面中心外 80mm 处环境温度，然后测量安全柜工作区中心处测柜内温度，工作区中心温度应不高于柜外环境温度 8℃。

3.13 电机与风机

用风量计测量安全柜在正常运行时风机的总气流流量，用压力计测量静态正压和负压 ；限制安全柜的负压气流，使初始负压读数增加初始正压读数的 50% 或更大，用风量计测量安全柜的总气流流量 ；计算最终的风机风量相对初始风量的变化。

风机的电机应保证当安全柜在正常运行而不调整风机的速度控制，经过滤器的风压下降 50% 时，风机的排气量下降应不超过 10%。

3.14 负压

Ⅲ级安全柜正常运行时工作区应有不低于 120Pa 的负压。