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苏州净化生物安全柜的性能检测,生物安全柜的性能检测

[导读]生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性 标本等具有感染性的实验材料时,用来保护操作者、实验 室环境以及实验材料,使其避免暴露于操作过程中可能产 生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。生物安全柜在微生 物学、生物医学、基因重组、生物制品等领域得到了广泛 的使用,是实验室生物安全中一级防护屏障中基本的安 全防护设备。 , 本文介绍了生物安全柜的分级,性能检测依据的标准以及检测方法。

0  前言

生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性 标本等具有感染性的实验材料时,用来保护操作者、实验 室环境以及实验材料,使其避免暴露于操作过程中可能产 生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。生物安全柜在微生 物学、生物医学、基因重组、生物制品等领域得到了广泛 的使用,是实验室生物安全中一级防护屏障中基本的安 全防护设备。 2002 年,卫生部颁布了《WS233-2002 微生物和生物 医学实验室生物安全通用准则》,用于规范各级微生物和生 物医学实验室的生物安全防护。在2003 年,SARS 暴发流 行和高致病性禽流感发生后,国家加强了对医院、防疫部 门、科研单位和高等院校等单位生物防护的监管。生物安 全柜在医院、科研、生物制品、教学等领域的应用快速增长。 2004 年,国家发布了《GB19489-2004 实验室生物安全通 用要求》,要求将生物安全柜作为一种对保护实验室工作人 员是必不可少的主要安全设备,在安装或维修后应按照经 确认的方法进行现场检测,并且须每年进行验证,同时要 求实验室操作人员具备规范化、标准化使用生物安全柜的 能力。

1  生物安全柜的分级

GB19489 根据所操作的生物因子的危害程度和采取的 防护措施,将生物安全防护水平分为 4 级,Ⅰ级防护水平 低,Ⅳ级防护水平高。美国国家健康研究院(NIH) 和疾病预防与控制中心(CDC) 将生物安全柜根据结构、 排气方式、气流速度和类型划分成Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级 3 个 级别。中国医药卫生行业标准《YY0569-2005 生物安全柜》 也依此分级,见表 1。

1.1  Ⅰ级生物安全柜 Ⅰ级生物安全柜从前窗开口区向内吸入的负压气流用 以保护人员的安全,排出气流经HEPA 过滤器过滤排出以 保护环境。其特点如下 :① 工作空间前开口处有定向的流 入的气流,流速 0.7~1.0m/s ;② 在负压状态下工作 ;③ 出风经过 HEPA 过滤器过滤,可向实验室内排出。

1.2  Ⅱ级生物安全柜 Ⅱ级生物安全柜从前窗开口区向内吸入具有一定速度 的气流,保护操作者 ;垂直的、无颗粒的层流气体保护工 作区内的样品不会受到交叉感染 ;排出气体经HEPA 过滤 器过滤以保护环境。Ⅱ级生物安全柜细分为 A1、A2、B1、 B2 型,见表 2。其特点如下 :① 工作空间前开口处有定向 的流入的气流;② 经HEPA过滤器过滤后,有向下层流气流; ③ 在负压状态下工作;④ 出风经过 HEPA 过滤器过滤排出。

1.3  Ⅲ级生物安全柜 Ⅲ级生物安全柜具有全封闭、不泄露的结构,操作者 必须通过手套进行操作。其特点如下 :① 无气流流入口, 当去掉单只手套后手套连接口的气流流速不低于0.7m/s ; ② 至少在 120Pa 的负压下工作 ;③ 出风需经过双 HEPA 过 滤器或经过一道HEPA 过滤器过滤再经焚烧处理,可向实 验室内排风。

2  依据标准

国际上公认的标准主要有NSF49-2002和EN12469:2000。 2002 年,NSF49 获得了美国国家标准学会(ANSI)的官方 认可,成为美国生物安全柜的统一标准。2000 年,欧洲标 准化委员会(CEN)颁布了EN12469,EN12469 成为欧盟 区域内生物安全柜的统一标准。目前,NSF49 和 EN12469 是生物安全柜领域重要的标准。YY0569 以 NSF49:2002 为基础,并结合了欧盟标准 EN12469:2000 的特色。

3  生物安全柜的性能检测

3.1  柜体防泄漏 柜体防泄漏测试有2种方法,即压力衰减法和肥皂泡 法。压力衰减法测试 :将安全柜的前窗和排风口封闭,柜 体内加压到500Pa,保持 30min 后,测试柜内气压,防泄 漏性能良好的安全柜内压不低于450Pa。肥皂泡法测试:将安全柜的前窗和排风口封闭,沿安全柜压力通风系统的 所有焊缝、套接处和封口处的外表面喷或涂刷肥皂溶液, 同时柜内加压到500Pa,观察否有气泡产生,如果发生大 的泄漏,可通过轻微的气流感觉和声音发现。 压力衰减法使用压力计或压力传感器系统测试,可以 定量的检测柜体的密闭性,是测试柜体防泄漏准确、要 求高的一种测试方法。肥皂泡法测试效果不如压力衰减 法精确可靠。 3.2  高效过滤器完整性 高效过滤器主要起到过滤细菌、气溶胶和灰尘颗粒的 作用,净化吹入安全柜工作区和排放出的气体。高效过滤 器的完整性是安全柜检测的重要的指标。 高效过滤器的检测需要气溶胶发生器和光度计2个专 用设备。气溶胶发生器用以产生气溶胶颗粒,光度计用以 测试高效过滤器的过滤效率。 (1)可扫描检测的过滤器。运行安全柜,去掉过滤器 的散流装置和保护盖,安放气溶胶发生器,将气溶胶(其 光散射强度至少应等于10μg/L DOP 产生的光散射强度) 导入安全柜,产生均匀分布的高效过滤器上游气流。光度 计探头在过滤器下游距过滤器表面不超过25mm,以小于 50mm/s 的扫描速率移动,使探头扫测过滤器的整个下游一 侧和每个组合过滤片的边缘,扫测路线应略微重叠。围绕 整个过滤器外围,沿组合过滤片和框架的连接处以及围绕 过滤器和其他部件之间的密封处仔细扫测。所有检测点的 漏过率不超过 0.01%。 (2)不可扫描检测的过滤器。对于经管道排气的安全 柜,在下游气流的管道上钻一个直径大约10mm 的孔,将 带有硬管光度计探针插入孔中进行检测。检测点的漏过率 不大于 0.005%。

3.3  噪声 打开安全柜的风机和照明灯,使用声级计测量安全柜 前面中心水平向外 300mm、工作台面上方 380mm 处噪声 ; 关闭风机和照明灯,测量相同位置背景噪声。安全柜的噪 声不超过 67dB。

3.4  照度 在安全柜工作台面上,沿台面两内侧壁中心连设置 照度测量点,测量点之间的距离不超过 300mm,与侧壁 小距离为150mm ;关掉安全柜的灯,使用照度计从 一侧起依次在测量点测量背景照度,平均背景照度应在 (110±50)lx ;打开安全柜的灯,启动风机,依次在测 量点测量照度。安全柜平均照度不应小于 650lx,每个照 度实测值不小于 430lx。

3.5  振动 将振动仪的传感元件固定在工作台面的几何中心。测 量安全柜正常工作时的总振动振幅。关闭安全柜的风机(室 外风机工作),测定背景振动振幅。安全柜在频率 10Hz 和 10kHz 之间的净振动振幅(总振动振幅减背景振动振幅) 不超过 5μm。

3.6  人员、产品与交叉污染保护

3.6.1  人员保护 人员保护有 2 种检测方法 :微生物法和碘化钾法。微 生物法需制备枯草芽孢、杆菌芽孢,测试后要经过细菌培养, 操作复杂,用时较长,不便于外出开展检测。碘化钾法是 定义在 EN12469 上的,测试方法与微生物法相同,用碘化 钾代替了细菌,可当场验证安全柜污染控制性能,操作性 强,用时较短。 (1)微生物法。将盛有5×108/mL~8×108/mL 的芽孢 悬浮液的喷雾器放在安全柜内,喷雾器喷嘴的轴线在工作 台面上方360mm 处,喷嘴前端位于前窗操作口内100mm 处,喷雾方向平行于台面且正对操作口 ;喷雾器的圆筒固 定在台面上的中心,一端贴住工作区的后壁,另一端从操 作口伸出安全柜至少 150mm,圆筒的轴线高于台面 70mm ; 6 个撞击采样器呈左右对称放置在柜前,6 个采样口正对安 全柜 ;1 个阳性对照琼脂培养皿放在圆筒下 ;2 个狭缝采样 器的采样口平面与台面平行,采样口的垂直轴线在安全柜 前方 150mm 处,各距内侧壁200mm ;启动喷雾器,运行 5min。测试持续30min。在无菌的条件下,用滤膜滤取所 有撞击采样器的采样液体,将滤膜置于培养基上 ;有滤膜 的培养基、对照培养皿和狭缝采样器的培养皿在37.0℃培 养。培养到 24~28h 时检查计数,如果呈阴性,继续培养至 总培养时间达 44~48h 时检查计数。 Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢杆菌芽孢进行实验,从全 部撞击采样器收集的芽孢菌菌落数应不超过 10CFU/ 次,狭 缝采样器的培养皿收集的芽孢菌菌落数应不超过 5CFU/ 次, 对照皿应阳性(>300CFU)。 (2)碘化钾法。将气雾发生器放置在安全柜的工作台 面上,使气雾发生器圆盘的中心位于仪器模拟臂的中心上, 圆盘的边缘到安全柜平面开口的距离是 100mm,圆盘与安 全柜开口上边缘平行。气雾发生器产生雾状的KI微小液滴,安全柜外模拟臂上的 4 个空气采样器采集从安全柜内逃逸 出的 KI 微粒。采样结束后,取出采样器内的过滤薄膜,将 薄膜放到 PdCl2 溶液中显色,计数薄膜上灰棕色的小圆点。 Ⅱ级生物安全柜用碘化钾法测试,保护因子应不小于 1×105,即每个薄膜上灰棕色的小圆点数都应<62个。重 复试验 5 次,每次均应符合要求。

3.6.2   产品保护 在安全柜的工作台面上排满敞开的琼脂培养皿 ;圆筒 固定在台面上的中心区,一端贴住工作区的后壁,另一端 从前窗操作口伸出安全柜至少 150mm,圆筒的轴线高于台 面 70mm ;盛有 5×106/mL~8×106/mL的芽孢悬浮液的喷 雾器放在柜外,喷雾器喷射轴在安全柜中心并与操作口上 沿平齐,喷雾器的喷嘴前端位于操作口外100m,喷雾方 向平行于台面,正对操作口 ;一个阳性对照琼脂培养皿放 在圆筒下 ;启动喷雾器,运行5min。喷雾器关闭5min 后 盖上琼脂培养皿的盖子 ;将培养皿在37.0℃培养。培养到 24~28h 时检查计数,如果呈阴性,继续培养至总培养时间 达 44~48h 时检查计数。 Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢杆菌芽孢进行试验,菌落 数应不超过 5CFU/ 次,对照皿应阳性。

3.6.3   交叉污染保护 将盛有 5×104/mL~8×104/mL的芽孢悬浮液的喷雾器 置于安全柜内,紧靠左侧内壁的中心,喷雾器喷射轴线在 工作台面上 76~30mm 处,喷射方向平行于台面,正对对面 的侧壁 ;两排对照培养皿位于喷嘴下方,距喷雾器所在侧 壁 360mm 处放一排培养皿, 距喷雾器所在侧壁 360mm 外放 一排培养皿 ;启动喷雾器,运行5min。15min 后盖上培养 皿,37.0℃培养。将喷雾器放于靠右侧内壁中央重复测量。 培养基培养到 24~28h 时检查计数,如果呈阴性,继续培养 至总培养时间达 44~48h 时检查计数。 Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢、杆菌芽孢进行实验,菌 落数应不超过 2CFU/ 次。

3.7  下降气流流速 Ⅱ级安全柜下降气流流速应在0.25~0.5m/s。下降 气流流速应在标称值±0.015m/s。均匀下降气流的安全 柜,各测量点实测值与平均流速相差均应不超过±20% 或 ±0.08m/s。非均匀下降气流的安全柜各区域实测的下 降气流流速应在其区域下降气流标称值±0.015m/s,各测 量点实测值与其区域平均流速相差均应不超过±20%或 ±0.08m/s。 (1)均匀下降气流的安全柜。在工作区上方高于前窗 操作口上沿 100mm 的水平面上,用风速仪多点测量穿过该 平面的下降气流流速。测量区域边界与安全柜的内壁及前 窗操作口的距离为 150mm ;测量点少应有 3 排,每排 少应有7个测量点,测量点等距分布,形成的正方形栅格不大于 150mm×150mm。 (2)非均匀下降气流的安全柜。在工作区上方高于前 窗操作口上沿 100mm 的水平面上,用风速仪多点(测量点 间距不大于 100mm)测量穿过该平面各区域的下降气流流 速。

3.8  流入气流流速 用密封条带将风量计的风罩密封在安全柜的前窗操作 口中心,罩两边留的开口区域也要密封 ;运行安全柜,读 取5次风量计读数,计算流入气流的平均流量。流入气流 的平均流量除以前窗操作口面积,得到流入气流的平均流 速。

3.9  气流模式 (1)下降气流测试。烟雾沿工作台面的中心线,在前 窗操作口顶端以上100mm 的高度从安全柜的一端到另一 端,观察烟雾流动。Ⅱ级安全柜工作区内的气流应向下, 应不产生漩涡和向上气流且无死点 ;气流应不从柜中逸出。 (2)观察窗气流测试。烟在观察屏后25mm,在前窗 操作口顶端以上 150mm 高度从安全柜的一端到另一端,观 察烟雾流动。气流应不从柜中逸出。 (3)前窗操作口边缘气流测试。烟在安全柜外大约 38mm 处沿着整个前窗操作口的周边经过,观察烟雾流动。 Ⅰ级和Ⅱ级安全柜前窗操作口整个周边气流应向内,无向 外逸出的气流 ;Ⅱ级安全柜的前窗操作口流入气流不进入 工作区。 (4)滑动窗密闭性测试。烟在滑动窗内从距安全柜侧 壁和工作区顶部50mm 经过,观察烟雾流动。气流应不从 柜中逸出。

3.10  集液槽泄漏 用至少 4L 水充满集液槽,保持 1h。1h 后应无渗漏。

3.11  稳定性 采用静力加载测试安全柜结构的稳定性,包括柜体抗 翻倒,柜体抗变形,柜体抗向前倾倒和工作台面抗变形。

3.12  温升 安全柜照明灯和风机持续运行 4h 后,测量安全柜前窗 操作口面中心外80mm 处环境温度,然后测量安全柜工作 区中心处测柜内温度,工作区中心温度应不高于柜外环境 温度 8℃。

3.13  电机与风机 用风量计测量安全柜在正常运行时风机的总气流流量, 用压力计测量静态正压和负压 ;限制安全柜的负压气流, 使初始负压读数增加初始正压读数的 50% 或更大,用风量计测量安全柜的总气流流量 ;计算终的风机风量相对初 始风量的变化。 风机的电机应保证当安全柜在正常运行而不调整风机 的速度控制,经过滤器的风压下降 50% 时,风机的排气量 下降应不超过 10%。

3.14  负压 Ⅲ级安全柜正常运行时工作区应有不低于120Pa 的负压。


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0  前言

生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性 标本等具有感染性的实验材料时,用来保护操作者、实验 室环境以及实验材料,使其避免暴露于操作过程中可能产 生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。生物安全柜在微生 物学、生物医学、基因重组、生物制品等领域得到了广泛 的使用,是实验室生物安全中一级防护屏障中基本的安 全防护设备。 2002 年,卫生部颁布了《WS233-2002 微生物和生物 医学实验室生物安全通用准则》,用于规范各级微生物和生 物医学实验室的生物安全防护。在2003 年,SARS 暴发流 行和高致病性禽流感发生后,国家加强了对医院、防疫部 门、科研单位和高等院校等单位生物防护的监管。生物安 全柜在医院、科研、生物制品、教学等领域的应用快速增长。 2004 年,国家发布了《GB19489-2004 实验室生物安全通 用要求》,要求将生物安全柜作为一种对保护实验室工作人 员是必不可少的主要安全设备,在安装或维修后应按照经 确认的方法进行现场检测,并且须每年进行验证,同时要 求实验室操作人员具备规范化、标准化使用生物安全柜的 能力。

1  生物安全柜的分级

GB19489 根据所操作的生物因子的危害程度和采取的 防护措施,将生物安全防护水平分为 4 级,Ⅰ级防护水平 低,Ⅳ级防护水平高。美国国家健康研究院(NIH) 和疾病预防与控制中心(CDC) 将生物安全柜根据结构、 排气方式、气流速度和类型划分成Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级 3 个 级别。中国医药卫生行业标准《YY0569-2005 生物安全柜》 也依此分级,见表 1。

1.1  Ⅰ级生物安全柜 Ⅰ级生物安全柜从前窗开口区向内吸入的负压气流用 以保护人员的安全,排出气流经HEPA 过滤器过滤排出以 保护环境。其特点如下 :① 工作空间前开口处有定向的流 入的气流,流速 0.7~1.0m/s ;② 在负压状态下工作 ;③ 出风经过 HEPA 过滤器过滤,可向实验室内排出。 

1.2  Ⅱ级生物安全柜 Ⅱ级生物安全柜从前窗开口区向内吸入具有一定速度 的气流,保护操作者 ;垂直的、无颗粒的层流气体保护工 作区内的样品不会受到交叉感染 ;排出气体经HEPA 过滤 器过滤以保护环境。Ⅱ级生物安全柜细分为 A1、A2、B1、 B2 型,见表 2。其特点如下 :① 工作空间前开口处有定向 的流入的气流;② 经HEPA过滤器过滤后,有向下层流气流; ③ 在负压状态下工作;④ 出风经过 HEPA 过滤器过滤排出。 

1.3  Ⅲ级生物安全柜 Ⅲ级生物安全柜具有全封闭、不泄露的结构,操作者 必须通过手套进行操作。其特点如下 :① 无气流流入口, 当去掉单只手套后手套连接口的气流流速不低于0.7m/s ; ② 至少在 120Pa 的负压下工作 ;③ 出风需经过双 HEPA 过 滤器或经过一道HEPA 过滤器过滤再经焚烧处理,可向实 验室内排风。

2  依据标准

国际上公认的标准主要有NSF49-2002和EN12469:2000。 2002 年,NSF49 获得了美国国家标准学会(ANSI)的官方 认可,成为美国生物安全柜的统一标准。2000 年,欧洲标 准化委员会(CEN)颁布了EN12469,EN12469 成为欧盟 区域内生物安全柜的统一标准。目前,NSF49 和 EN12469 是生物安全柜领域重要的标准。YY0569 以 NSF49:2002 为基础,并结合了欧盟标准 EN12469:2000 的特色。

3  生物安全柜的性能检测

3.1  柜体防泄漏 柜体防泄漏测试有2种方法,即压力衰减法和肥皂泡 法。压力衰减法测试 :将安全柜的前窗和排风口封闭,柜 体内加压到500Pa,保持 30min 后,测试柜内气压,防泄 漏性能良好的安全柜内压不低于450Pa。肥皂泡法测试:将安全柜的前窗和排风口封闭,沿安全柜压力通风系统的 所有焊缝、套接处和封口处的外表面喷或涂刷肥皂溶液, 同时柜内加压到500Pa,观察否有气泡产生,如果发生大 的泄漏,可通过轻微的气流感觉和声音发现。 压力衰减法使用压力计或压力传感器系统测试,可以 定量的检测柜体的密闭性,是测试柜体防泄漏准确、要 求高的一种测试方法。肥皂泡法测试效果不如压力衰减 法精确可靠。 3.2  高效过滤器完整性 高效过滤器主要起到过滤细菌、气溶胶和灰尘颗粒的 作用,净化吹入安全柜工作区和排放出的气体。高效过滤 器的完整性是安全柜检测的重要的指标。 高效过滤器的检测需要气溶胶发生器和光度计2个专 用设备。气溶胶发生器用以产生气溶胶颗粒,光度计用以 测试高效过滤器的过滤效率。 (1)可扫描检测的过滤器。运行安全柜,去掉过滤器 的散流装置和保护盖,安放气溶胶发生器,将气溶胶(其 光散射强度至少应等于10μg/L DOP 产生的光散射强度) 导入安全柜,产生均匀分布的高效过滤器上游气流。光度 计探头在过滤器下游距过滤器表面不超过25mm,以小于 50mm/s 的扫描速率移动,使探头扫测过滤器的整个下游一 侧和每个组合过滤片的边缘,扫测路线应略微重叠。围绕 整个过滤器外围,沿组合过滤片和框架的连接处以及围绕 过滤器和其他部件之间的密封处仔细扫测。所有检测点的 漏过率不超过 0.01%。 (2)不可扫描检测的过滤器。对于经管道排气的安全 柜,在下游气流的管道上钻一个直径大约10mm 的孔,将 带有硬管光度计探针插入孔中进行检测。检测点的漏过率 不大于 0.005%。 

3.3  噪声 打开安全柜的风机和照明灯,使用声级计测量安全柜 前面中心水平向外 300mm、工作台面上方 380mm 处噪声 ; 关闭风机和照明灯,测量相同位置背景噪声。安全柜的噪 声不超过 67dB。

3.4  照度 在安全柜工作台面上,沿台面两内侧壁中心连设置 照度测量点,测量点之间的距离不超过 300mm,与侧壁 小距离为150mm ;关掉安全柜的灯,使用照度计从 一侧起依次在测量点测量背景照度,平均背景照度应在 (110±50)lx ;打开安全柜的灯,启动风机,依次在测 量点测量照度。安全柜平均照度不应小于 650lx,每个照 度实测值不小于 430lx。 

3.5  振动 将振动仪的传感元件固定在工作台面的几何中心。测 量安全柜正常工作时的总振动振幅。关闭安全柜的风机(室 外风机工作),测定背景振动振幅。安全柜在频率 10Hz 和 10kHz 之间的净振动振幅(总振动振幅减背景振动振幅) 不超过 5μm。 

3.6  人员、产品与交叉污染保护 

3.6.1  人员保护 人员保护有 2 种检测方法 :微生物法和碘化钾法。微 生物法需制备枯草芽孢、杆菌芽孢,测试后要经过细菌培养, 操作复杂,用时较长,不便于外出开展检测。碘化钾法是 定义在 EN12469 上的,测试方法与微生物法相同,用碘化 钾代替了细菌,可当场验证安全柜污染控制性能,操作性 强,用时较短。 (1)微生物法。将盛有5×108/mL~8×108/mL 的芽孢 悬浮液的喷雾器放在安全柜内,喷雾器喷嘴的轴线在工作 台面上方360mm 处,喷嘴前端位于前窗操作口内100mm 处,喷雾方向平行于台面且正对操作口 ;喷雾器的圆筒固 定在台面上的中心,一端贴住工作区的后壁,另一端从操 作口伸出安全柜至少 150mm,圆筒的轴线高于台面 70mm ; 6 个撞击采样器呈左右对称放置在柜前,6 个采样口正对安 全柜 ;1 个阳性对照琼脂培养皿放在圆筒下 ;2 个狭缝采样 器的采样口平面与台面平行,采样口的垂直轴线在安全柜 前方 150mm 处,各距内侧壁200mm ;启动喷雾器,运行 5min。测试持续30min。在无菌的条件下,用滤膜滤取所 有撞击采样器的采样液体,将滤膜置于培养基上 ;有滤膜 的培养基、对照培养皿和狭缝采样器的培养皿在37.0℃培 养。培养到 24~28h 时检查计数,如果呈阴性,继续培养至 总培养时间达 44~48h 时检查计数。 Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢杆菌芽孢进行实验,从全 部撞击采样器收集的芽孢菌菌落数应不超过 10CFU/ 次,狭 缝采样器的培养皿收集的芽孢菌菌落数应不超过 5CFU/ 次, 对照皿应阳性(>300CFU)。 (2)碘化钾法。将气雾发生器放置在安全柜的工作台 面上,使气雾发生器圆盘的中心位于仪器模拟臂的中心上, 圆盘的边缘到安全柜平面开口的距离是 100mm,圆盘与安 全柜开口上边缘平行。气雾发生器产生雾状的KI微小液滴,安全柜外模拟臂上的 4 个空气采样器采集从安全柜内逃逸 出的 KI 微粒。采样结束后,取出采样器内的过滤薄膜,将 薄膜放到 PdCl2 溶液中显色,计数薄膜上灰棕色的小圆点。 Ⅱ级生物安全柜用碘化钾法测试,保护因子应不小于 1×105,即每个薄膜上灰棕色的小圆点数都应<62个。重 复试验 5 次,每次均应符合要求。 

3.6.2   产品保护 在安全柜的工作台面上排满敞开的琼脂培养皿 ;圆筒 固定在台面上的中心区,一端贴住工作区的后壁,另一端 从前窗操作口伸出安全柜至少 150mm,圆筒的轴线高于台 面 70mm ;盛有 5×106/mL~8×106/mL的芽孢悬浮液的喷 雾器放在柜外,喷雾器喷射轴在安全柜中心并与操作口上 沿平齐,喷雾器的喷嘴前端位于操作口外100m,喷雾方 向平行于台面,正对操作口 ;一个阳性对照琼脂培养皿放 在圆筒下 ;启动喷雾器,运行5min。喷雾器关闭5min 后 盖上琼脂培养皿的盖子 ;将培养皿在37.0℃培养。培养到 24~28h 时检查计数,如果呈阴性,继续培养至总培养时间 达 44~48h 时检查计数。 Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢杆菌芽孢进行试验,菌落 数应不超过 5CFU/ 次,对照皿应阳性。 

3.6.3   交叉污染保护 将盛有 5×104/mL~8×104/mL的芽孢悬浮液的喷雾器 置于安全柜内,紧靠左侧内壁的中心,喷雾器喷射轴线在 工作台面上 76~30mm 处,喷射方向平行于台面,正对对面 的侧壁 ;两排对照培养皿位于喷嘴下方,距喷雾器所在侧 壁 360mm 处放一排培养皿, 距喷雾器所在侧壁 360mm 外放 一排培养皿 ;启动喷雾器,运行5min。15min 后盖上培养 皿,37.0℃培养。将喷雾器放于靠右侧内壁中央重复测量。 培养基培养到 24~28h 时检查计数,如果呈阴性,继续培养 至总培养时间达 44~48h 时检查计数。 Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢、杆菌芽孢进行实验,菌 落数应不超过 2CFU/ 次。 

3.7  下降气流流速 Ⅱ级安全柜下降气流流速应在0.25~0.5m/s。下降 气流流速应在标称值±0.015m/s。均匀下降气流的安全 柜,各测量点实测值与平均流速相差均应不超过±20% 或 ±0.08m/s。非均匀下降气流的安全柜各区域实测的下 降气流流速应在其区域下降气流标称值±0.015m/s,各测 量点实测值与其区域平均流速相差均应不超过±20%或 ±0.08m/s。 (1)均匀下降气流的安全柜。在工作区上方高于前窗 操作口上沿 100mm 的水平面上,用风速仪多点测量穿过该 平面的下降气流流速。测量区域边界与安全柜的内壁及前 窗操作口的距离为 150mm ;测量点少应有 3 排,每排 少应有7个测量点,测量点等距分布,形成的正方形栅格不大于 150mm×150mm。 (2)非均匀下降气流的安全柜。在工作区上方高于前 窗操作口上沿 100mm 的水平面上,用风速仪多点(测量点 间距不大于 100mm)测量穿过该平面各区域的下降气流流 速。

3.8  流入气流流速 用密封条带将风量计的风罩密封在安全柜的前窗操作 口中心,罩两边留的开口区域也要密封 ;运行安全柜,读 取5次风量计读数,计算流入气流的平均流量。流入气流 的平均流量除以前窗操作口面积,得到流入气流的平均流 速。 

3.9  气流模式 (1)下降气流测试。烟雾沿工作台面的中心线,在前 窗操作口顶端以上100mm 的高度从安全柜的一端到另一 端,观察烟雾流动。Ⅱ级安全柜工作区内的气流应向下, 应不产生漩涡和向上气流且无死点 ;气流应不从柜中逸出。 (2)观察窗气流测试。烟在观察屏后25mm,在前窗 操作口顶端以上 150mm 高度从安全柜的一端到另一端,观 察烟雾流动。气流应不从柜中逸出。 (3)前窗操作口边缘气流测试。烟在安全柜外大约 38mm 处沿着整个前窗操作口的周边经过,观察烟雾流动。 Ⅰ级和Ⅱ级安全柜前窗操作口整个周边气流应向内,无向 外逸出的气流 ;Ⅱ级安全柜的前窗操作口流入气流不进入 工作区。 (4)滑动窗密闭性测试。烟在滑动窗内从距安全柜侧 壁和工作区顶部50mm 经过,观察烟雾流动。气流应不从 柜中逸出。

3.10  集液槽泄漏 用至少 4L 水充满集液槽,保持 1h。1h 后应无渗漏。 

3.11  稳定性 采用静力加载测试安全柜结构的稳定性,包括柜体抗 翻倒,柜体抗变形,柜体抗向前倾倒和工作台面抗变形。 

3.12  温升 安全柜照明灯和风机持续运行 4h 后,测量安全柜前窗 操作口面中心外80mm 处环境温度,然后测量安全柜工作 区中心处测柜内温度,工作区中心温度应不高于柜外环境 温度 8℃。 

3.13  电机与风机 用风量计测量安全柜在正常运行时风机的总气流流量, 用压力计测量静态正压和负压 ;限制安全柜的负压气流, 使初始负压读数增加初始正压读数的 50% 或更大,用风量计测量安全柜的总气流流量 ;计算终的风机风量相对初 始风量的变化。 风机的电机应保证当安全柜在正常运行而不调整风机 的速度控制,经过滤器的风压下降 50% 时,风机的排气量 下降应不超过 10%。 

3.14  负压 Ⅲ级安全柜正常运行时工作区应有不低于120Pa 的负 压。






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