前言

二级生物安全柜除了提供对实验样品或生产产品的保护和对操作人员的保护以外。它还应该对安全柜内使用的其它仪器或器材减少气溶胶的污染。即在安全柜内一边产生的污染气溶胶不致扩散到另一边。通过这个实验可以验证安全柜内垂直平行流的气流情况。本实验就是在安全柜内的两侧分别发生气溶胶来检测当柜虎产生高浓度的微生物气溶胶时，安全柜对在其内部使用的其它仪器或器材的保护能力

材料方法

1、喷雾悬液的制备：制备方法同人员保护实验。将制备好的悬液稀释成1×10‘_810 pfu／ml的枯草杆菌芽胞进行气溶胶攻击。

2、气溶胶发生：发生条件同人员防护实验。

3、实验方法

a、发生器的喷口轴线置于工作面上

76-127毫米之间．发生器的尾部紧靠安全柜左内壁的中间。喷口平行于工作面．并正对着对面边壁。

b、在安全柜工作面上辅满打开盖的琼脂平皿(100×10毫米)，如图l所示．

c、开始发生气溶胶．5分钟后停止，但安全柜要继续运行l5分钟．

d、将平皿盖好，在盖平皿时安全柜要继续保持通风。将样品置于37℃ 培养24-28小时后计数．如为阴性，再培养44-48小时，并计数。

e、按(a—d)的步骤重复同样的实验，但发生器要放置在安全拒的右面与前面的实骚对应的位置上．

4、台格标准

在靠近发生器一侧356毫米内的某些平皿应有菌落生长，并以此作为阳性对照。每次实验在>356毫米以外的平皿上生长的菌落总数不应超过2个．实骚分别M左边到右边重复3次。

结果

表1和表2所列为发生器分别置于左侧和右侧在距离安全柜侧壁356毫米以内和356毫米以外所有采样平皿中生长的菌落总数．

只需用1×104～8×10 prum 或5×10-10×10pru^m 的枯草杆菌芽胞的枯草秆菌努胞悬液作为气溶胶发生的喷雾敞。预蚤实验中我讹发现用此浓度的悬液，阳 对照所有的l9个平皿中仅有发生器喷口前方第-yq中靠近后排风格栅的2个平皿 育苗落生长，总共只有l6个苗落。郎在离安全拒有发生嚣一舾拍200毫米外的所有平皿中均无菌落生长。按照美国标准．只要靠近发生器一侧356毫米内的平皿中有菌落生长，距离发生器较远的一侧，即从有发生器一侧356毫米以外的所有平皿中生长的菌落数不超过2个即为合格．

这样倒是很容易达到要求 但是扳婀日l奉标准则要求阳性对照的菌落数要>300 个。因此我们在实验中提高了喷雾悬液的浓度，使其与产品防护实验中所采用的浓度一样，即I×10-8×10 pru／lmi，这样才使阳性对照平皿中的菌落总数达到300个以上，结果参见表l和表2。因此我们建议如 我们国家今后要制订类似标准，可适当提高喷雾液的浓度

2、美国标准中要求用平皿将工作旨面盖满；日本标准中则要求从左(右)侧350毫米(平皿中心)处开贻 陌盖E 750毫米长的占面，丽阳性对照平皿只在喷雾器嘤嘴正下方设置1个 艰掂我们的实验结果，我们认为可作适当改进。① 船果安全柜的送、排风量和安全柜内的气流断面速度及其气流均匀度(附和单向扫}c条他、达到设计要求的话，可不按美国标准将平皿铺满整个台面或日牟标准中将平皿疆盖350毫米以外的750毫米长的台面 ② 日奉标准中在喷雾器喷嘴正下方只放置1个平皿的方法似不合理 从罔2和图3可以看出，由于气溶胶在出口f1j具有一定的初速度．粒子受惯性的作用，仍耍向前运动，质量较大的粒子，本身所具畜的惯性也大，运动的路程远 质量较小的粒子惯 小，运动的路程短 同时安全柜的送风在上生部分是均匀地、自上而下流动；在下半部分由于排风口分别设置在工作台面的前部和后部，前面格橱暇／ 的气流主要足来自安全柜外的新； 磬避 过滤器过滤的大部分气主要是越过后鄂的格艟吸^排限管遵， l-在安全柜的下半部分的气流足向后‘F方流动的。这样气溶皎粒子的受力就是发生器的喷射力 安全柜的送排风动力+ 杞= 本身的重力。气溶歧粒子的运动方向也就 ：这三个力的台成方向 囡此大部分粒平会落到发生器的前方偏I 安全柜后部的平皿中， 而不足在发生器喷嘴的正下方。所以我们认为阳性对照平皿不应只殴置t个。因为这1个平皿的位置不宜确定．理由是由于 同f l发生器发生的粒子大，J、不同，喷雾气体流量不同， 气溶胶出口的气流速度不同，造成了气藩腔粒子的落点不同 这样仅靠1个平皿有时可能会收集不到含菌气溶胶粒子。尤其是程喷雾液浓度比较低，发生器雾化量比较小的时候更是如此。在我竹的预备实验中在满布台面的平皿中就只有2个平皿采集到蒂菌粒子。当然，只要安全柜的各项物理指标附和标准要求．为了减少平皿用量，也不必像美国标准那样要满布整个白面，因为标准中规定在距离发生器一侧356毫米以外相所有平皿中菌落散不应超过2个，也就足说，这些平皿中箍多月能有2个平皿中允许有苗落生长，而这2 个含菌粒子落到远处的机会足很小的。因此，没有必要放置那么多平只在356毫米线外放置2～3列平皿就可以丁。另外，如果阳性对照平皿只要求有菌落生长，丽没有明确的数量限制的话，也可考虑取消发生器喷口线内的l列平皿．因为这1列乎皿采到含菌粒子的数量也是很少的。

3 强实验结果着，德国Steage公司生产的安全柜的交叉污染防护性能足相当好的。

实际使用一不可能(也不允许、在这种文全柜内像我们实验中那样大量发生气溶胶，可能造成污染的仅仅是正常的无菌操作和使用的曩嚣设备产生的少量的气溶胶。因此，只要物品放置台理、附干“使用要求，就不会造成安全柜内样品的交叉污染